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cell-free protein synthesis

文獻筆記

利用無細胞系統的定向演化技術優化核醣體 – RISE技術平台

by Eric Juo 2024 年 1 月 19 日

定向演化(Directed Evolution)是一個讓合成生物學家著迷的技術,這個概念在2018年榮獲諾貝爾獎,實驗內容是使用嗜菌體表達無數種枯草桿菌蛋白酶變體,再以有機溶劑篩選,挑出適者生存的變體,再次變異及表達,經過多輪的汰選後,產生能夠在有機溶劑中保持活性的枯草桿菌蛋白酶。如今這個技術也以不同的方式,成功在無細胞系統中執行。

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文獻筆記

優化無細胞蛋白質合成的3個步驟 | 100L級細胞萃取液和100ML級CFPS

by Eric Juo 2023 年 12 月 31 日

無細胞蛋白合成(Cell Free Protein Synthesis; CFPS)是非常吸引人的技術,能夠在短時間內生產所需要的蛋白,從細胞裂解液製備到進行CFPS反應生產實驗室規模1mg蛋白只需要不到一周的時間,而且細胞裂解液可以提前製備好,當需要生產蛋白時再組成CFPS反應,只需要一天就可以生產出需要的蛋白。不過要將提高產量到工業規模並且可以被廣泛應用,則需要注重批次生產的一致性,也就是針對生產過程的關鍵影響步驟進行品質管控。

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文獻筆記

只加入剛好材料的TX-TL系統 | One Pot PURE Cell-Free System

by Eric Juo 2023 年 12 月 9 日

無細胞蛋白質合成系統(Cell-Free Protein Synthesis System),又被稱為轉錄-轉譯系統(TX-TL System),最早是利用細胞裂解液為基底,再加入DNA模板、能量系統、tRNA、胺基酸及鹽類,在試管內完成轉錄及轉譯反應合成蛋白,這種方式只要先把細胞放大後,提前製備成為細胞裂解液保存於冰箱,就可以隨時拿出來合成蛋白。缺點是每批次的細胞裂解液成分略有不同,導致蛋白質合成效率不一致,而且細胞裂解液屬於複雜的混合物,難以對成分進行調整優化。因此科學家提出了以明確成分進行無細胞蛋白質合成的系統,稱為PURE system (Protein synthesis Using Recombinant Element)。

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文獻筆記

生產蛋白質居然只要1天不到!? | 無細胞蛋白質合成技術

by Eric Juo 2023 年 12 月 2 日

過去生技產業生產蛋白質的方式是提供外源性DNA模板到細菌或是哺乳類細胞中,借用細胞內的蛋白質合成系統來生產蛋白。不過細胞也不是笨蛋,不會一股腦地為別人生產蛋白,細胞還是得製造自己生存需要的蛋白,因此很難再提高蛋白質生產的上限。除此之外,細胞對於生產的蛋白也有偏好,具有細胞毒殺性的蛋白產量就會非常的低。

要不我們不要細胞了?

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化工系博士班學生

一位工作多年回歸學術生活的博士班學生,以生物學背景探索化工領域,目前的研究興趣是無細胞蛋白質合成系統與酵素代謝工程。

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